動(dòng)物疫病病原臨床樣品采集送檢注意事項(xiàng)
動(dòng)物疫病病原臨床樣品采集送檢注意事項(xiàng)
張濤/中農(nóng)威特生物科技股份有限公司
近年來，隨著新發(fā)動(dòng)物傳染病的不斷涌現(xiàn)，以及“老病”的繼續(xù)肆虐，我國(guó)豬傳染性疫病情況更加復(fù)雜，防控壓力日益增大，嚴(yán)重危害著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，同時(shí)對(duì)養(yǎng)豬場(chǎng)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，我國(guó)針對(duì)動(dòng)物傳染性疾病采取的防控原則為：預(yù)防為主，防治結(jié)合。這就要求我們要搞好疫苗免疫接種工作，同時(shí)也要加強(qiáng)各種動(dòng)物疫病病原體的檢測(cè)，加強(qiáng)豬群一些傳染性疫病抗體效價(jià)的檢測(cè)，定期對(duì)疫苗免疫后進(jìn)行抗體滴度的監(jiān)測(cè)，做到以檢測(cè)數(shù)據(jù)指導(dǎo)科學(xué)合理的制定免疫程序。由于許多養(yǎng)豬場(chǎng)從業(yè)人員專業(yè)能力普遍較低，個(gè)人防護(hù)意識(shí)較弱，經(jīng)常出現(xiàn)采集的樣品不能用，或者由于存放、運(yùn)輸不當(dāng)，造成樣品的不合格，進(jìn)而影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，偶爾也有養(yǎng)豬場(chǎng)工作人員在樣品采集過程中感染某些動(dòng)物疫病，現(xiàn)就采樣前準(zhǔn)備、臨床樣品采集、保存和送檢方法，其他的一些注意事項(xiàng)做簡(jiǎn)要介紹。
一、采樣前個(gè)人防護(hù)和器械準(zhǔn)備
1.個(gè)人防護(hù)。樣品采集人員要充分認(rèn)識(shí)到豬群可能感染有一些烈性的人獸共患病，在樣品采集的過程中可能會(huì)通過直接接觸、受損的黏膜等途徑傷及采集人員，也可能經(jīng)采集人員將病原體帶到外界造成擴(kuò)散。因此在樣品采集前必須做好個(gè)人防護(hù)工作。穿戴安全可靠的的防護(hù)服（盡可能使用一次性高級(jí)別防護(hù)服）、一次性手套、防護(hù)帽、醫(yī)用口罩、護(hù)目鏡、膠鞋等。
2.器械。采集血液樣品時(shí)盡可能使用一次性塑料采血針或真空采血管，分離組織樣品時(shí)所有器械必須嚴(yán)格消毒，避免帶入其他病原體。應(yīng)根據(jù)豬只大小選擇采血針頭的大小，同時(shí)，準(zhǔn)備碘伏、記號(hào)筆、抓豬器、耳標(biāo)等器具。針對(duì)不同的采血對(duì)象選擇合適針頭；準(zhǔn)備毛剪、消毒棉球、記號(hào)筆、自封袋等。
3.豬群。對(duì)豬群采集血液樣品最好在早晨，動(dòng)物空腹時(shí)進(jìn)行。病死豬病理解剖應(yīng)該有專業(yè)人員指導(dǎo)，謹(jǐn)慎操作，若發(fā)現(xiàn)血液凝固不良、天然孔出血等癥狀，懷疑為感染炭疽的病例時(shí)禁止解剖。采集的動(dòng)物臨床樣品應(yīng)該具有群體代表性。
二、血液樣品的采集
血液是養(yǎng)豬場(chǎng)臨床送檢樣品中最常檢測(cè)的，主要是通過定期采集血液樣品并分離血清進(jìn)行一些動(dòng)物疫病抗體水平的檢測(cè)，用準(zhǔn)確數(shù)據(jù)分析養(yǎng)豬場(chǎng)疫病防控壓力，進(jìn)而制定科學(xué)合理的免疫程序。
1.豬群選擇。豬群接種疫苗后進(jìn)行抗體水平監(jiān)測(cè)采集的血液樣品，應(yīng)在疫苗免疫后3周采集，采取隨機(jī)抽取樣品的方式，通常采集30~100份血液樣品就可以反映出所在豬群的整體疫苗免疫后抗體滴度情況。發(fā)病豬群采集血液樣品送高級(jí)別實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行抗體檢測(cè)和疫病確診時(shí)，對(duì)所有出現(xiàn)典型臨床癥狀或有疑似癥狀的豬只盡可能都采集血液樣品進(jìn)行檢測(cè)，用于某些動(dòng)物病毒檢測(cè)的血液樣品應(yīng)在豬只發(fā)病初期，體溫升高時(shí)采集。對(duì)于定期進(jìn)行的豬場(chǎng)疫病監(jiān)測(cè)及動(dòng)物流行病學(xué)調(diào)查分析，采集樣品時(shí)應(yīng)根據(jù)豬群的數(shù)量按一定的比例隨機(jī)抽取血液樣品進(jìn)行檢測(cè)。
2.采集方法。最好選用一次性的注射器或者一次性的真空采血管，經(jīng)耳緣靜脈或前腔靜脈采集，應(yīng)根據(jù)豬只大小選擇大小和長(zhǎng)度都合適的針頭，盡量找準(zhǔn)位置，避免反復(fù)多次扎針，減少豬只的應(yīng)激反應(yīng)，采集血液量一般為為4~8ml。對(duì)于種豬，由于體型較肥大，一般采用耳緣靜脈采集血液。具體步驟為：將種豬進(jìn)行站立保定，擦洗干凈耳朵，用力對(duì)耳緣靜脈的近心端用力摁壓，配合使用酒精棉球來回涂擦、拍打耳緣靜脈使血管怒張，針頭朝著耳尖方向刺入血管，緩慢抽取所需血液量，然后用干棉球進(jìn)行壓迫止血，對(duì)采集的血樣及時(shí)進(jìn)行標(biāo)號(hào)。
對(duì)于小豬或架子豬，主要采用前腔靜脈采血為主。小豬一般采用仰臥保定，用碘伏棉球?qū)︻i部皮膚消毒后，手持一次性獸用采血器輕輕扎向右側(cè)凹窩，稍微偏向中央位置，回抽注射器，見有回血，緩慢抽取所需血液量；架子豬通常站立保定，用抓豬繩套住豬的上頜骨用力向前上方拉，使得豬的頭頸部稍微上揚(yáng)，可充分暴露豬的胸前凹窩，用碘伏棉球消毒凹窩處皮膚后，手持一次性獸用采血器，朝右側(cè)胸前凹窩最低處垂直扎針，回抽采血器見有回血，緩慢抽動(dòng)采血器活塞采集所需血液量，采血后用酒精棉球壓迫止血。同時(shí)，對(duì)采集的血樣及時(shí)進(jìn)行標(biāo)號(hào)。
3.血清的分離。血液采集后應(yīng)稍微傾斜著室溫或37℃放置1~2h，可加速血清的析出，之后使用離心機(jī)（5000轉(zhuǎn)/min，離心5~10min）分離血清。若養(yǎng)豬場(chǎng)條件有限沒有離心機(jī)，可多靜置一段時(shí)間待血清完全析出后緩慢倒出上層清亮的血清，將分離的血清樣品低溫保存并盡快送檢。
三、組織樣品的采集
主要針對(duì)已出現(xiàn)臨床癥狀的豬群采集組織進(jìn)行相關(guān)病原體的檢測(cè)。樣品采集前要對(duì)使用的器械進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，準(zhǔn)備相關(guān)的容器，同時(shí)對(duì)所檢測(cè)的病原體采集何種組織樣品應(yīng)該有清晰的了解。采集多種不同部位的組織樣品時(shí)不能只重復(fù)使用一套器械和容器。
1.采樣豬的選擇。最好挑選臨床癥狀比較明顯的豬。檢測(cè)的病原體不同，所采集組織樣品的側(cè)重點(diǎn)也有所不同，對(duì)未確定檢測(cè)的病原體應(yīng)采集足夠的組織樣本，如果整群發(fā)病，應(yīng)選擇一定比例能代表整個(gè)群體發(fā)病特點(diǎn)的豬進(jìn)行組織樣品的采集。對(duì)于病死豬，應(yīng)盡快采集組織樣品，保證樣品的新鮮，全面。對(duì)于其他有特殊條件要求的樣本采集，一定要嚴(yán)格按照要求進(jìn)行采樣。
2. 樣品的選擇。盡可能選取有明顯病理變化部位的組織樣品，常見的組織樣品，主要以淋巴結(jié)、扁桃體、內(nèi)臟器官、流產(chǎn)胎兒、水泡皮、腸管、排泄物為主。采集的病料要具有典型的病變特征，應(yīng)在發(fā)病豬瀕死前或病死后短時(shí)間內(nèi)快速完成，盡量不超過6 h，以充分保證樣品的新鮮。同時(shí)，在病料采集過程中，應(yīng)嚴(yán)格注意個(gè)人防護(hù)和無菌操作，防止人為帶入外源病原體污染采集的組織樣品，造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。
對(duì)于疑似細(xì)菌性病原體感染的病豬，在采集樣品前5~7 d 禁止使用廣譜的抗生素類藥物，在組織樣品采集過程中一定要盡量保證無菌操作，如果是采集的糞便，應(yīng)該盡可能的新鮮，或者可以用棉拭子伸入直腸采集糞便。
對(duì)于疑似病毒性病原體感染的病豬，如能引起豬只蹄、鼻、口腔等部位出現(xiàn)水泡，潰爛的五種常見的水泡型病毒（口蹄疫、豬水皰病、水皰性口炎、豬水皰疹、塞內(nèi)卡病毒A）的組織樣品，應(yīng)采集出現(xiàn)典型臨床癥狀部位的組織（蹄冠、蹄叉、口腔部的水泡皮、水泡液）；能引起母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎的病毒（豬繁殖障礙與呼吸綜合征、豬細(xì)小病毒、乙型腦炎病毒）的組織樣品，應(yīng)采集發(fā)病母豬的淋巴結(jié)、扁桃體以及流產(chǎn)、畸形胎兒的脾臟；能引起豬腹瀉的病毒（豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、輪狀病毒、新型冠狀病毒）的組織樣品，應(yīng)采集新鮮糞便、腸內(nèi)容物、小腸腸管。對(duì)于采集的組織樣品應(yīng)應(yīng)使用無菌容器密封保存，并在冷藏條件下盡快送檢。
四、樣品的保存和送檢
科學(xué)的保存方法和快速有效的送檢，是保證檢測(cè)結(jié)果真實(shí)可信，指導(dǎo)后續(xù)疫病防治的重要環(huán)節(jié)，應(yīng)切實(shí)遵循科學(xué)采樣、低溫密封保存、盡快送檢，做好生物安全措施，防止疫病的傳播，同時(shí)應(yīng)加強(qiáng)環(huán)保意識(shí)，采集的樣品檢測(cè)后應(yīng)進(jìn)行無害化、分類處理，保證不污染生態(tài)環(huán)境。樣品送檢時(shí)要附帶養(yǎng)豬場(chǎng)實(shí)際的生產(chǎn)資料，包括免疫程序、疫苗批號(hào)、廠家信息、豬群健康信息和飼養(yǎng)方式等，以方便檢測(cè)人員能快速、全面、準(zhǔn)確地檢測(cè)樣品和分析數(shù)據(jù)，同時(shí)能夠及時(shí)準(zhǔn)確地向養(yǎng)殖戶反饋相關(guān)信息。
采集的血液樣品，應(yīng)盡量是血清樣品，并且血清樣品盡可能2℃~8℃冷藏保存，低溫條件下盡快送檢，一般從采樣到送檢的時(shí)間不超過7天，否則會(huì)造成樣品中抗體效價(jià)的降低；對(duì)于全血樣品，從采樣到送檢的時(shí)間一般不超過3天，否則會(huì)在送檢途中會(huì)出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，影響血清的分離，進(jìn)而影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
采集的檢測(cè)細(xì)菌性病原體的組織樣品，應(yīng)在2℃~8℃低溫條件下快速送檢，最好不要冷凍。采集的檢測(cè)病毒性病原體的組織樣品，應(yīng)在冷凍條件下短時(shí)間內(nèi)快速送檢，有條件的可以保存在小型液氮罐中快速送檢，如果不能及時(shí)送檢的，應(yīng)先凍存在在-80℃超低溫冰箱或液氮中，并盡快安排送檢。
五、樣品檢測(cè)
對(duì)于待檢樣品，檢測(cè)人員應(yīng)做好樣品信息登記工作，同時(shí)根據(jù)送檢樣品的不同性質(zhì)，采取不同的科學(xué)檢測(cè)方法開展快捷高效的樣品檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析，及時(shí)向養(yǎng)殖戶出具真實(shí)可信的樣品檢測(cè)報(bào)告，并對(duì)所發(fā)現(xiàn)的問題給予相關(guān)的意見和建議，指導(dǎo)養(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行科學(xué)合理的疫病預(yù)防、治療以及凈化工作。
來源：《獸醫(yī)導(dǎo)刊》雜志第4期
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