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豬場血清學(xué)檢測樣品采集標(biāo)準(zhǔn)
血清學(xué)檢測,是豬場最廣泛使用的檢測方法之一.本案例中,筆者對江蘇某豬場送檢的193份血清樣進(jìn)行了豬瘟抗體、豬偽狂犬gB/gE抗體、豬圓環(huán)病毒抗體、豬藍(lán)耳病毒抗體的檢測和分析.結(jié)果顯示該場后備母豬豬瘟免疫欠佳,豬偽狂犬病免疫不合格,豬藍(lán)耳病抗體水平偏高;母豬豬偽狂犬病毒感染程度較高,豬呼吸與繁殖綜合征普遍感染且抗體偏高;公豬豬圓環(huán)病毒抗體水平偏高商品豬豬瘟免疫效果不穩(wěn)定豬藍(lán)耳病感染比較普遍,且部分豬群抗體水平偏高,豬圓環(huán)病毒病免疫欠佳.結(jié)合該場免疫程序,表明該場后備母豬和商品豬的豬瘟、豬偽狂犬病免疫程序需要做適當(dāng)調(diào)整;同時(shí)考慮通過測序了解本場的豬藍(lán)耳病流行毒株,以確定合適的防控方案.
豬的抗體檢測是指通過檢測豬的血清或乳汁中的抗體含量,來反映機(jī)體感染或免疫保護(hù)情況的一種方法。實(shí)驗(yàn)室檢測排除檢測方法自身敏感性、穩(wěn)定性與人為操作因素的影響外,檢測結(jié)果是否對豬場有價(jià)值、準(zhǔn)確還會(huì)受以下幾方面因素影響。
1.影響因素
1.1豬只個(gè)體差異
不同豬只個(gè)體對病原微生物感染或疫苗免疫后反應(yīng)不同,其體內(nèi)抗體滴度也有很大的差異,因此,檢測時(shí)要有足夠的樣品數(shù)量,滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)的需求,盡量降低個(gè)體差異對檢測、分析造成的影響。
此外,豬只個(gè)體的差異還表現(xiàn)在不同胎次的母豬,對抗原反復(fù)接觸后體內(nèi)抗體滴度也存在差別,母豬按胎次采樣,可用于分析豬群對疫苗免疫麻痹性的影響之外,也可以消除個(gè)體差異對檢測結(jié)果、分析產(chǎn)生的誤差。
1.2不同抗原的性質(zhì)
抗原有兩個(gè)基本特性:抗原性和免疫原性。抗原性指抗原與其所誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合的能力;免疫原性是指能引起免疫應(yīng)答的性能,即抗原能刺激特定的免疫細(xì)胞,使免疫細(xì)胞活化、增殖、分化,最終產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)抗體和致敏淋巴細(xì)胞的特性。例如:同抗原(如疫苗和野毒)有不同的免疫原性,其對免疫系統(tǒng)的刺激是不同的,雖然都是先感染再產(chǎn)生抗體(首次感染期內(nèi)一般只能檢出抗原,抗體反應(yīng)是滯后的),但不同抗原產(chǎn)生抗體的時(shí)間是不同的。
1.3母源抗體的因素
豬只體內(nèi)不同病原微生物的母源抗體的消長規(guī)律,峰值期各有不同,進(jìn)行采樣、檢測與結(jié)果分析時(shí)都應(yīng)考慮這些因素,否則,要么分析錯(cuò)誤,要么成為無價(jià)值的檢測。
1.4感染或免疫后的時(shí)間
感染或免疫后產(chǎn)生的抗體有其消長規(guī)律及持續(xù)時(shí)間,這就導(dǎo)致感染/免疫后不同階段其抗體滴度是不同的,也會(huì)顯示出很高的離散度。因此,樣品采集時(shí),需根據(jù)不同的目的,根據(jù)免疫時(shí)間或日齡分階段采集符合統(tǒng)計(jì)學(xué)需求的樣本。例如在偽狂犬野毒陽性豬場檢測90日齡的仔豬gE抗體為陽性的,一定是偽狂犬野毒感染嗎?偽狂犬的母源抗體持續(xù)期特別長,一般可維持至90日齡,所以如果是偽狂犬野毒陽性豬場,90日齡之前的仔豬野毒抗體陽性比例必然是比較高的,因此單純檢測是無法判斷的。
1.5免疫次數(shù)或再次感染
豬只初次接觸抗原和再次接觸抗原,其抗體產(chǎn)生的速度和滴度是顯著不同的。通過抗體滴度和免疫信息分析,可反映豬場是否存在野毒的感染。這需要建立在分階段采樣的意識上,對檢測豬群進(jìn)行合理的分組。
2.采樣標(biāo)準(zhǔn)原則
綜合上述影響結(jié)果的因素,豬場樣本采集需要根據(jù)檢測目的的不同,合理的進(jìn)行分組,具體要求需要考慮以下幾方面。
2.1樣本有效性
樣品數(shù)量:根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)一般規(guī)律,采樣量20頭時(shí)可信度達(dá)98%,30頭時(shí)可信度達(dá)99%,40頭時(shí)可信度達(dá)99.5%,50頭時(shí)可信度達(dá)99.9%。
對下列豬群和豬場的采樣比例做如下劃分:
(1)公豬、后備種豬>懷孕母豬>產(chǎn)房母豬>保育、育肥豬。
(2)檢測重要性:祖代場>父母代場>商品場。
(3)在上述采樣標(biāo)準(zhǔn)的前提下,祖代場和父母代場的采樣比例需適當(dāng)上浮10-20%。
2.2公豬與后備母豬的采樣
根據(jù)豬場實(shí)際情況,如果豬精自供,建議定期對全部公豬的血清進(jìn)行檢測,每年采集2-3次,重點(diǎn)檢測PRV和PRRSV等抗體;如果是外購,建議選擇正規(guī)的廠家,并可要求出具檢測報(bào)告。
后備母豬一般在進(jìn)隔離舍后(確定后備進(jìn)場后疫苗的免疫時(shí)間),隔離1個(gè)月后 (檢測馴化或被本場毒株感染情況)及混群前2周共進(jìn)行3次采樣檢測,樣本的比例為15%或至少10頭;如果涉及偽狂犬陰性場引種、偽狂犬gE抗體需逐頭檢測,至少在進(jìn)隔離舍后7d全部檢測完成。如果發(fā)現(xiàn)有陽性,淘汰后在混群前還需全群檢測,發(fā)現(xiàn)有g(shù)E陽性則堅(jiān)決不能混群,直至連續(xù)兩次間隔7d檢測全陰性才可混群。
2.3母豬的采樣原則
母豬群根據(jù)檢測目的的不同,母豬可按以下3種方式采樣。
A.按胎次采樣
按不同胎次進(jìn)行采樣,分析可得出豬場是否存在免疫抑制性因素等現(xiàn)象,分析低胎次母豬的細(xì)小、乙腦等免疫保護(hù)是否合格,評估是否存在公豬精液傳播的途徑(如偽狂犬)的影響,1年需檢測3-4次。
B.按妊娠階段采樣
該方法適用于跟胎免疫或批次化管理(根據(jù)妊娠階段免疫)的豬場檢測疫苗免疫的持續(xù)期和保護(hù)期,監(jiān)測母豬的免疫程序合理性;也適合監(jiān)測普免豬場檢測調(diào)整仔豬的免疫時(shí)間;監(jiān)測周期1年3-4次。
C.按疫苗免疫后的時(shí)間采樣
適用于普免豬場的免疫持續(xù)期檢測,分析疫苗的免疫干擾因素及免疫效果,檢測周期1年3-4次。
在對母豬進(jìn)行采樣中,統(tǒng)計(jì)時(shí)詳細(xì)記錄樣本的胎次、妊娠階段及免疫時(shí)間,進(jìn)行合理化的分組。為了達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求,在采樣程中,適當(dāng)增加樣本數(shù)量,減少因樣品因素造成誤差。
2.4仔豬的采樣原則
仔豬的采樣按照日齡和免疫時(shí)間采樣,可以用于分析母源抗體滴度(判斷首免日齡)及免疫起效期、持續(xù)期并發(fā)現(xiàn)豬場野毒感染的規(guī)律,推薦按照以下的兩種方式采樣。
A.疫苗免疫時(shí)間
該采樣方法可以持續(xù)跟蹤某種疫苗的抗體消長規(guī)律,分析疫苗免疫效果。
B.按日齡采樣
該采樣方法可以同時(shí)檢測不同階段的免疫效果,用于綜合分析疫苗或野毒感染狀況。
綜合上述,多種因素都會(huì)對血清學(xué)檢測結(jié)果、分析產(chǎn)生影響,因此我們在采集樣品時(shí),盡量滿足以上采樣要求,使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確,為豬場提供更精確的服務(wù)。
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